Hpv high risk amplified probe positive

Popa, Iai Prof. Universitatea de Medicin i Farmacie Gr. Introducere 2.

Stadiul actual al cunoaterii 2. Structura papillomavirusurilor 2. Componente virale i proprieti fizice 2. Genomul HPV i ciclul replicrii virale 2. Clasificarea papillomavirusurilor 2. Istoria natural a infeciei HPV 2. Caracteristicile epiteliului cervical 2. Transmiterea infeciei HPV 2. Progresia leziunilor 2. Mecanisme carcinogenetice 2. Capacitatea transformant a HPV 2. Interaciunea HPV cu factorii de mediu 2.

Metode de diagnostic ale cancerului cervical i a leziunilor precanceroase 2. Metode de inspecie vizual 2. Metode citologice i histologice 2. Metode de biologie molecular 2. Alternative terapeutice ale leziunilor precanceroase i ale cancerului cervical 2. Prevalena, incidena, persistena i clearance-ul infeciei HPV 2. Obiectivele studiului 4.

Epidemiologia infeciei cu HPV 5. Optimizarea metodei de detecie a 37 genotipuri HPV 6. Prevalena i distribuia genotipurilor HPV n rndul femeilor din zona Moldovei 9. Corelaii ale ncrcturii virale a HPV 16 i HPV 18 cu gradul displaziei cervicale i cu factorii de risc hpv high risk amplified probe positive neoplaziei cervicale Infecii asimptomatice cu transmitere sexual Concluzii generale Originalitatea contribuiilor proprii Perspectivele pe care le deschide teza Bibliografie 1.

Introducere Cei mai frecveni ageni etiologici ai infeciilor cu transmitere sexual ITS sunt Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum, Haemoplilus ducreyi, Chlamydia trachomatis, virusul herpes simplex 2, virusul papilloma uman, Trichomonas vaginalis. Este binecunoscut faptul c cele mai multe ITS sunt simptomatice, dar nu se cunoate frecvena i importana infeciilor asimptomatice n transmiterea ITS.

Pe baza prezenei simptomelor, indivizii pot fi divizai n mai multe categorii: indivizi simptomatici simptomele sunt prezente ; indivizi cu infecie inaparent individul prezint simptome dar nu sunt recunoscute ca fiind produse de o ITS ; persoane asimptomatice- aceasta categorie este important, deoarece numai pacienii simptomatici vor solicita tratament specific.

Dintre infecile produse de ageni etiologici amintii, numai n cazul ancrului moale, majoritatea indivizilor sunt simptomatici, cu un numr considerabil de infecii inaparente.

papiloma tumor benigno que alimentos producen oxiuros

Studiile de istorie natural care analizeaz infeciile cu HPV, Neisseria gonorrhoeae i Chlamydia trachomatis indic faptul c aceti indivizi r mn n mod caracteristic asimptomatici, pe cnd indivizii cu herpes genital prezint n mod tipic infecie inaparent i nu asimptomatic. Dintre toi aceti ageni care produc infecii genitale, studiul din cadrul tezei de doctorat a analizat doar infeciile produse de HPV.

Pe de alt parte, majoritatea femeilor din rile n curs de dezvoltare nu hpv high risk amplified probe positive acces la programele de profilaxie a cancerului de col uterin, ceea ce explic diagnosticarea acestei forme de cancer n stadii care depesc prin severitate, capacitile terapeutice actuale 3. Romnia, cu o populaie de 9. Estimrile actuale indic faptul c n fiecare an aproximativ de femei sunt diagnosticate cu cancer de col uterin i aproape mor din cauza bolii.

Variantele genice ale Interleukinei 1β -511 C>T şi neoplazia intraepitelială cervicală

Dei dup formularea relaiei de cauzalitate dintre HPV i cancerul de col uterin, n majoritatea rilor au fost iniiate studii extinse n vederea cunoaterii prevalenei i distribuiei infeciei cu HPV Human Papilloma Virusn Romnia, studii similare au fost ntreprinse sporadic, pe loturi nesemnificative, iar datele rezultate nu au fost sistematic raportate, motiv pentru care, despre Romnia se afirm c nu sunt date disponibile despre aceti indicatori Raport OMS, Harald zur Hausen a formulat, nipoteza c HPV joac un rol important n etiologia cancerului de col uterin, identificnd mpreun hpv throat cancer michael douglas echipa sa, n perioadagenotipurile HPV 16 i HPV 18 n tumori ale cervixului; descoperirea a fost rspltit cu Premiul Nobel pentru Medicin i Fiziologie 6.

Rolul HPV n oncogenez este demonstrat cu certitudine nu numai pentru cancerul de col uterin ci i n etiologia altor tipuri de cancere anogenitale anus, vulv, vagin, penis sau cancere ale capului i gtului. Spre deosebire de alte neoplazii, cancerul de col uterin poate fi prevenit prin programe de screening concepute pentru a identifica i trata leziunile precanceroase.

Terapia leziunilor hpv high risk amplified probe positive poate fi chirurgical, prin tehnici distructive e. Perspectiva studiilor epidemiologice privind incidena i prevalena infeciilor cu HPV se va rsfrnge n trecerea de la profilaxia de tip secundar screeningla profilaxia primar prin vaccinaren paralel cu eficientizarea programelor de promovare a sntii 9. Organizaia Mondial a Sntii OMS recunoate importana cancerului de col uterin ca problem global de sntate public i recomand vaccinarea HPV, ca vaccinare de rutin Obiectivele studiului Lipsa datelor ntr-o ar aflat pe primul loc n Europa n ceea ce privete incidenta si mortalitatea prin cancer cervical, necesitatea acumulrii de date tiinifice utile decidenilor politici pentru stabilirea strategiei de prevenire i control a BTS boli cu transmitere sexualinclusiv infeciile HPV, au condus la stabilirea urmtoarelor obiective tiinifice ale acestei teze de doctorat: 1.

Epidemiologia infeciei cu HPV La nceputul anilor 90 studii epidemiologice bazate pe tehnici de biologie molecular i cercetri privind istoria natural a infeciei cu Human Papilloma Virus HPV localizat hpv high risk amplified probe positive nivelul tractului genital, au adus dovezi suficient de puternice pentru a atribui un rol cauzal determinant al HPV n inducerea cancerului cervical.

Aceast asociere a fost evaluat pe baza criteriilor de cauzalitate elaborate de experi din colectivitai de cercetare, de la institute internaionale de renume. Modelul propus de aceast relaie de cauzalitate este valabil la nivel mondial i nu exist alte dovezi alternative care s explice etiologia cancerului cervical. HPV a fost astfel propus drept cauz necesar a cancerului cervical. De asemenea, aceast descoperire a dus la iniierea programelor de prevenie primar a infeciei determinate de HPV, prin descoperirea formulei vaccinale.

Dovada etiologic a implicrii HPV n producerea cancerului cervical a fost demonstrat de studii populaionale n ntreaga lume. Fac excepie doar forme rare de limfoame cervicale, sarcoame i alte tipuri histologice rare.

Studiile comparative au presupus testarea femeilor care aveau caracteristici similare cu cele ale pacientele din lotul de studiu: vrst, status educaional, expunerea la factori de risc adiionali. Pacientele HPV pozitive pentru 16 sau 18 se consider a avea un risc mult mai crescut dect pacientele infectate cu alte serotipuri.

Din acest motiv, serotipurile 16 i 18 fac parte din categoria HR HPV, mpreun cu genotipurile 31, 33, hpv high risk amplified probe positive, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, Numitorul comun pentru rile n curs de dezvoltare este reprezentat de status-ul socieoeconomic sczut i de lipsa programelor de screening hpv high risk amplified probe positive n detectarea precoce a leziunilor canceroase i precanceroase. Pe de alt parte, cancerul cervical afecteaz femei relativ tinere, ceea ce duce automat la scderea speranei de via.

O estimare recent concluzioneaz c neoplazia cervical este cea mai important cauz de pierdere de ani de viata pentru rile n curs de dezvoltare. Estim rile GLOBOCAN sunt publicate pentru anul 42pe sexe i pe grupe de vrstbazndu-se pe datele recente furnizate de IARC; la acestea se adaug informa iile oficiale disponibile pe site-urile institu iilor de s n tate public i datele provenite din surse locale.

Dificultile n interpretarea acestor date sunt explicate m car n parte de faptul c sursele de date sunt n continu cretere i ele nu pot fi hpv high risk amplified probe positive i comparate deoarece nregistrarea acestora nu se face dup o metodologie unitar i deci, exist inegaliti n ceea ce privete colectarea de date att calitativ ct i cantitativ.

Aceste precizri privind calitatea datelor nregistrate hpv high risk amplified probe positive, mortalitate, morbiditate sunt utile atunci cnd tentm s comparm valori ale diferitelor forme de cancer hpv high risk amplified probe positive, n diferite ri de pe glob.

De multe ori, diferenele observate pot fi rezultatul utilizrii unei metodologii diferite, sau care se modific n hpv high risk amplified probe positive, pentru aceeai ar, ceea ce poate 9 duce la valori total diferite ale incidenei hpv high risk amplified probe positive aceeai ar.

Pe baza acestor date putem observa incidena extrem de sczut a cazurilor de cancer de col uterin n rile din Europa de vest i n rile Nordice, n America de Nord i Australia. La pol opus se remarc valorile ngrijortoare ntlnite n rile din Africa, America de Sud 50 Lipsa programelor eficiente de screening precum i gradul sczut de informare al populaiei papilloma bladder cancer cu risc, sunt probabil principalele cauze ce au dus la creterea incidenei cancerului de col uterin n aceste zone ale globului.

Date recente iunie situeaz Romnia pe primul loc n Europa n ceea ce privete incidena Lipsa acestor date pentru Romnia poate fi explicat, macar hpv high risk amplified probe positive parte, prin dificultatea centralizrii unor date dup o metodologie unic i prin absena hpv high risk amplified probe positive soft-ware dedicat, pentru nregistrarea corect, complet i unitar a datelor privind cancerele nregistrate la nivel regional, respectiv naional.

O a doua explicaie este lipsa fondurilor necesare testrii prin tehnici de biologie molecular, n vederea stabilirii prevalenei i distribuiei genotipurilor HPV n rndul populaiei feminine. Al doilea obiectiv este acela de a stabili rolul ncrcturii virale ca biomarker n diagnosticarea leziunilor displazice, obiectiv care presupune selectarea pacientelor HPV 16 i HPV 18 pozitive, monitorizarea ncrcturii virale, astfel nct s putem stabili acea valoare prag a ncrcturii virale util diagnosticului precoce, n vederea instituirii msurilor terapeutice n timp util.

Toate acestea reprezint o provocare pentru noile modaliti de testare, pentru c implementarea de noi metode de screening naional presupune i consideraii politice. O asemenea problem s-a pus n Anglia, i anume, un proiect multicentric randomizat i-a propus s evalueze dac testarea HPV poate reduce incidena cancerului cervical ntr-o manier cost eficient.

Prin asemenea tipuri de proiecte se poate demonstra c utiliznd o singur rund de testare HPV se poate cheltui mai puin dect realiznd 2 runde de citologie n mediu lichid. Un asemenea proiect poate fi indeplinit n ri unde exist un program de screning al cancerului cervical foarte hpv high risk amplified probe positive organizat i sistematizat. Implementarea presupune de asemenea ca femeile testate s primeasc mai multe informaii despre testarea ce urmeaz a li se realiza, precum i o infrastructur adecvat pentru urmrirea pe termen ndelungat programe de screening organizate i iniiative ale guvernelor de a participa la aceste aciuni Una din cele mai importante descoperiri medicale n ultimii 50 de ani a fost indentificarea HPV drept cauz primar a cancerului cervical.

De asemenea, aceaai informaie a condus la dezvoltarea de teste screening care identific virusul direct n celulele cervicale, n opoziie cu abordarea convenional hpv in utero a observa anomaliile citologice cauzate de virus.

Hpv high risk amplified probe positive n domeniu au revizuit o multitudine de teste care au evideniat c testarea HPV este mult mai sensibil dect citologia i poate fi, n mod sigur realizat la intervale mai mari de timp.

Studii viitoare vor propune un nou algoritm pentru utilizarea testrii HPV ca unic test de hpv high risk amplified probe positive pentru femeile cu vrsta peste 30 de ani Recoltarea produselor patologice de la nivelul colului uterin se realizeaz cu ajutorul periuelor Cervex Brush care se descarc n recipientele pentru transportul probei ThinPrep PreservCyt Solution. Dup descrcarea periuei n soluia ThinPrep, aceasta se arunc.

Amplificarea intelor: Amplificarea intelor ADN HPV este realizat cu ajutorul polimerazei AmpliTaq Gold care faciliteaz amplificarea hot start, precum i cu ajutorul beta globinei ca i control.

Încărcat de

Iniial, mixul reaciei PCR este nclzit pentru a activa polimeraza AmpliTaq Gold, ceea ce favorizeaz denaturarea ADN-ului viral i a celui genomic, precum i punerea n contact cu secvenele primerilor int.

Pe masur ce amestecul se rcete, primerii upstream i downstream se fixeaz pe inta ADN. Acest process este repetat pentru un anumit numr de cicluri 40n fiecare ciclu avnd loc dublarea cantitii de amplicon.

Amplificarea are loc numai n regiunea genomului HPV sau a beta globinei, ntre cele mai apropiate perechi de primeri; nu are loc amplificarea ntregului genom. Amplificarea selectiv: Amplificarea selectiv a intelor de acid nucleic este obinut prin cancer de tiroide imagenes enzimei AmpErase uracil-N-glicozilaza i a deoxiuridin trifosfat.

Deoxiuridina nu este prezent n ADN-ul natural, dar este prezent ntotdeauna n ampliconi, datorit faptului c Mastermix-ul hpv virus en wratten deoxiuridin trifosfat; prin urmare, numai ampliconii conin deoxiuridin.

Enzima AmpErase, care este inclus n Mastermix, catalizeaz desfacerea deoxiuridenei hpv genital temizlik conine ADN, n reziduuri de deoxiuridin, prin deschiderea lanului de deoxiriboz la nivelul C1. Enzima 14 AmpErasa este inactiv la temperaturi peste 55 C, i, prin urmare nu va distruge ampliconii int.

Dup amplificare, hpv high risk amplified probe positive rest enzimatic este denaturat prin adaugarea soluiei de denaturare, ceea ce previne degradarea ampliconilor.

Ursu Ramona Gabriela

Ampliconii denaturai sunt trasferai n godeurile corespunzatoare din tavia de hibridizare, godeuri care conin lichidul de hibridizare i un singur strip din kit strip care conine probe de HPV i beta globin. Ampliconii fixai de biotin vor hibridiza acele probe oligonucleotidice care conin secvena corespunztoare probei complementare.

Ampliconul care conine secvene apropiate 1 pn la 3 neconcordanecomplementare probei, vor hibridiza cu aceast band. Reacia de detecie: Dup reacia de hibridizare, stripurile sunt splate pentru a ndeprta materialul nefixat. Se adaug n tvia hpv high risk amplified probe positive hibridizare un conjugat: peroxidaza de hrean streptavidina. Aceasta se va fixa pe ampliconii hibridizai cu oligonucleotidele de pe strip. Stripul este supus unor etape de splare pentru a ndeparta excesul de streptavidina.

Se adaug un substrat soluie care hpv high risk amplified probe positive peroxid de hidrogen i 3, 3, 5, 5 tetrametilbenzidin TMB. Validarea n cazul testului de genotipare a fost posibil prin ndeplinirea criteriilor de calitate pentru martorul pozitiv i negativ, cat i prin prezena benzilor de beta globin cu cele dou valori, high, respectiv low. Principiul RTPCR: intensitatea fluorescenei din sistemul de reaie este direct proporional cu cantitatea iniial a produsului de amplificat; vizualizarea este posibil prin utilizarea unei molecule fluorescente Comparaie PCR versus RT PCR : o fluorescena este endometrial cancer endometrioid n timpul fiecrui ciclu de amplificare semnalul este direct propoional cu cantitatea produsului PCR ; o curbele de amplificare cresc dup un numr de cicluri care este proporional cu cantitatea iniial de matri template ADN; o raportarea la valorile curbei standard va oferi date legate de cuantificarea produsului dorit Aceasta permite cuantificarea intei nainte de acumularea inhibitorilor, inactivarea polimerazei.

Evaluarea datelor qPCR Odat ce experimentul a fost finalizat, se realizeaz analiza datelor obinute.

squamous papilloma bladder

Baseline este ciclul iniial n RTPCR cnd se poate observa o mic schimbare n semnalul fluorescent, de obicei regsindu-se la ciclurile Cuantificarea absolut: presupune construirea unei curbe standard pentru fiecare int; curba standard este realizat dintr-o serie de diluii ale unei probe cu o concentraie cunosct; Ct-ul fiecrui standard se situeaz pe axa orizontaliar pe axa vertical sunt notate valorile logaritmice ale concentraiilor cunoscute; curba standard este utilizat pentru a estima concentraia probelor necunoscute.

Recoltarea produselor patologice i purificarea ADN HPV se realizeaz similar testului de genotipare, anterior detaliat. Singura deosebire este faptul c protocolul nu presupune concentrarea probei prin centrifugare, tehnica Real Time PCR fiind mult mai sensibil dect PCR ul clasic.

Ursu Ramona Gabriela

Pacienta H. Parametrii generai de soft-ul instrumentului pe baza parazitii baieti de cancer bucal es contagioso 5 standarde s-a ncadrat in limitele normale fig. Pacienta V. D, 23 ani, pozitiv pentru HPV 18, 53, Fig 7: Curba standard pacienta V.

Concluzie: n aceast etap a cercetrii a fost optimizat cuantificarea ncrcturii virale prin RT PCR, pentru genotipurile nalt oncogene de HPV, respectiv tipurile 16 i O strategie important pentru atingerea acestui demers este dezvoltarea, pregtirea i validarea unui panel de proficien pentru a califica metodele de genotipare i laboratoarele n care se utilizeaz aceste metode.

Apelul pentru participarea la acest studiu de competen a fost publicat pe site-ul OMS i trimis apoi birourilor regionale ale OMS n data de 10 apriliepentru publicul larg. Scopurile acestui panel au fost: a. Evaluarea competenei metodelor de tipare a HPV utilizate n hpv high risk amplified probe positive curent n laboratoare la nivel mondial; b.

Evaluarea sensibilitii deteciei tipurilor specifice de HPV, prin diferite metode de lucru; c. Identificarea problemelor fiecrei metode utilizate de rutin. Tipurile de HPV incluse au fost: hpv high risk amplified probe positive, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68a HPV 68 prototip i 68b ME izolat prin microscopie electronic.

Compoziia panelului este redat n tabelul XV. Nu a fost solicitat nici o tax de participare din partea laboratoarelor. Datorit resurselor limitate ale laboratorului de referin, nacesta doar a pregtit materialele, iar subcontractarea, administrarea i distribuia probelor a fost realizat de compania non-profit EQUALIS External Quality Assurance in Laboratory Medicine In Swedenactiv n domeniul asigurrii controlului extern.

Modelul hpv high risk amplified probe positive pentru testarea din a decurs bine i este considerat un model de organizare pe termen ndelungat, n ceea ce privete distribuirea panelurilor de proficien HPV n fiecare an.

hpv high risk amplified probe positive

Analiza datelor: datele analizate n acest raport includ toate rezultatele care au fost trimise nainte de data de 1 noiembrie Fiecare set de date a primit un numr cuprins ntre 1 i Aceste date au fost analizate n funcie de regiunea laboratorului i de metoda utilizat pentru genotipare.

Din datele trimise, s-a remarcat faptul c laboratoarele participante au utilizat metode comerciale precum i metode in-house Tabelul 2. Proporia rezultatelor corecte pentru genotiparea HPV, raportate de fiecare laborator n parte, a fost analizat n funcie de metoda utilizat. Aceste seturi de date nu au fost incluse n analiza genotip specific din acest raport.

Fiecare set de date trimis de fiecare laborator n parte a fost analizat, iar participanii au primit o scrisoare de feed back n noiembrie Rezultatele laboratoarelor care au au genotipat numai HPV 16 i 18 au fost excluse din aceast figur. Corelarea infeciei HPV cu factorii de risc ai displaziei cervicale.

Asevedeași